分离各种细胞器常用的方法是

1. 分离各种细胞器常用的方法是

分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。
细胞器的分离，一般采用差速离心法，此法是利用细胞各组分质量大小不同，在离心管不同区域沉降的原理，分离出所需组分，分离得到的细胞器，其纯度可采用电子显微镜法、免疫学法或测定标志酶活力法进行鉴定。

分离各种细胞器的方法
1、分离各种细胞器常用的方法是差速离心法。在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。

由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2一3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
2、密度梯度离心，用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。

2. 分离细胞不同细胞器的主要技术

1.离心技术

离心是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段。一般认为，转速为10~25Kr/min（千转/分）的离心机称为高速离心机；转速超过25Kr/min，离心力大于89Kg者称为超速离心机。目前超速离心机的最高转速可达100Kr/min，离心力超过500Kg。

（1）差速离心法
在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为核蛋白体。

由于各种细胞器在大小和密度上相互重叠，而且某些慢沉降颗粒常常被快沉降颗粒裹到沉淀块中，一般重复2～3次效果会好一些。差速离心只用于分离大小悬殊的细胞，更多用于分离细胞器。通过差速离心可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。
 速度逐渐提高，样品按大小先后沉淀





（2）密度梯度离心
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。

密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。分离活细胞的介质要求：能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高；pH中性或易调为中性；浓度大时渗透压不大；对细胞无毒。

速度沉降：
速度沉降主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。这种降方法所采用的介质密度较低，介质的最大密度应小于被分离生物颗粒的最小密度。生物颗粒（细胞或细器）在十分平缓的密度梯度介质中按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。

等密度沉降：
等密度沉降适用于分离密度不等的颗粒。细胞或细胞器在连续梯度的介质中经足够大离心力和是够长时间则沉降或漂浮到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的细胞或细胞器分离。等密度沉降通常在较高密度的介质中进行。

介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度，而且介质的梯度要求较高的陡度，不能太平缓。再者，这种方法所需要的力场通常比速率沉降法大10~100倍，故往往需要高速或超速离心，离心时间也较长。大的离心力、长的离心时间都对细胞不利。

大细胞比小细胞更易受高离心力的损伤，而且停留在等密度介质中的细胞比处在移动中的细胞受到更大的损伤。因此，这种方法适于分离细胞器，而不太适于分离和纯化细胞。

二、流式细胞术

流式细胞术是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术。在分析或分选过程中，包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群，分离纯度可达99%。包被细胞的液流称为鞘液，所用仪器称为流式细胞计。具体的流式细胞仪的分离原理看文章后的链接。

三、细胞电泳

在一定pH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动，这种现象称为细胞电泳。

引起细胞电泳的电位值称为ξ电位。各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同。在恒定的电场条件下，同种细胞的电泳速度相当稳定，因而可通过测定电泳速度来推算出细胞的ξ电位。

ξ电位常因细胞生理状态和病理状态而异，因此在诊断疾病上有一定价值。此外由于不同类型的细胞在电场中的泳动速度不同，细胞电泳尚可用来分离不同种类的细胞，例如可把淋巴样细胞与造血细胞分开。

3. 分离各种细胞器常用的方法是 ___ ．

细胞内不同的细胞器结构和功能不同，密度也不同，可以用旋转离心的方法利用不同的转速将不同的细胞器沉淀，密度大的在下边，密度小的在上边，即差速离心法．
  故答案为：差速离心法

4. 为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种,分离法？

【摘要】
为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种,分离法？【提问】
【回答】
【回答】
为了进行细胞培养,首先要从生物体取得细胞,目前获取细胞的方法有两种，如图所示【回答】
希望我的回答可以帮助到您，也恳切的希望你动动你可爱的小手指为我点亮赞，你的肯定对我很重要，辛苦- ̗̀(๑ᵔ⌔ᵔ๑)
【回答】

5. 简述主要免疫细胞分离方法和分离原理？

免疫磁珠法分离细胞原理：
免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。
免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法：
阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞
一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。
BD™ Imag 磁珠：
· 大小在0.1－0.45mm
· 包被了BD Pharmingen生产的高质量单抗
· 磁珠已为白细胞亚群的阳性和阴性分离法所优化
· 用于BD™ IMagnet direct magnet
将包被了特异性单抗的BD IMag磁珠加入细胞悬液，磁珠特异性地与有相应抗原的细胞亚群结合，通过BD™ IMagnet direct magnet分离得到的连有BD IMag磁珠的细胞可直接用于功能试验和用流式细胞仪检测。
缺点：
• 对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养
• 纯度低
• 容易阻塞FCM的喷嘴
BD IMag吸收大磁珠和小磁珠分离系统的优点，开发出直径约200nm中等大小磁珠。
• 技术简单，分离在普通的试管中完成
• 易于增大细胞用量
• 对细胞温和，不影响细胞功能及其分离后培养，可直接上流式
• 纯度高，回收率高
• 成本低
此外，Mouse lineage panel中biotin标记的抗体还可用于FCM分析细胞表面抗原，以及进行细胞/组织免疫荧光实验。

BD提供2种免疫磁珠：
· 包被了针对白细胞亚群的单抗的磁珠
· 包被了链霉亲和素（streptavidin）的磁珠：此种情况下，在实验系统中加入生物素标记的单抗，磁珠通过streptavidin与生物素标记的单抗结合，单抗与细胞表面相应抗原特异性结合而使细胞被磁珠间接捕获，从而达到分离。这种磁珠使研究者可根据自己需要选择生物素标记的各种单抗去分离目的细胞，应用范围更广泛，使用更灵活。
不同物种磁珠分离试剂
人： CD3, CD4, CD8, CD14, CD19；
小鼠： CD4, CD8a, CD14, CD45R/B220, CD90.2 (Thy1.2), CD11b, Ly-6G.
ë 利用Streptavidin连接的磁珠，只需选配biotin标记的所需单抗,就能分离更多种类细胞
新货聚焦：
现在，BD PMG又推出用于分离小鼠造血干细胞/祖细胞的新试剂mouse lineage panel。
其中包括5种biotin标记单抗，这些单抗能结合小鼠造血细胞的主要分化系细胞: T、B淋巴细胞，单核/巨噬细胞，粒细胞和红细胞。将这组试剂与Streptavidin Plus BD™ IMag Particles (557812) 联合使用，就能通过免疫磁性分离法去除小鼠骨髓造血细胞的主要分化系细胞，从而富集到造血干细胞和祖细胞（阴性片断）。
Mouse Lineage Panel（559971）：（5×2ml/vial） 可分离109 Mouse骨髓细胞
1) Biotin-anti-mouse CD3e (CD3 e chain)；
2) Biotin-anti-mouse CD11b；
3) Biotin-anti-mouse CD45R/B220；
4) Biotin-anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (Gr-1)；
5) Biotin-anti-mouse TER-119/Erythroid Cells (Ly-76)
磁分离细胞的重要指标是：
纯度和得率，这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小（磁性），然而太大的磁珠会影响细胞活性，也无法直接上流式。
目前市场上有2种磁性细胞分离系统：
* Small particles (≈50 nm) － MACS
* Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）
小磁珠 优点：
• 对细胞温和，不影响分离细胞的后续培养
• 可直接上流式检测，不影响散射光
缺点：
• 需要很强的磁场来分离细胞
• 分离速度很慢，得率不高
• 需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行
• 成本昂贵
大磁珠
• 技术简单，分离可在试管中完成
• 易于增减细胞用量
• 速度快，得率高
• 成本低

6. 要研究细胞内各种细胞器的结构和功能，需要将这些细胞器分离出来。常用的方法是什么？

答案是差速离心法
研究细胞内各种细胞器的组成成分和功能,需要将这些细胞器分离出来,常用的方法是差速离心法.差速离心法是将细胞膜破坏后,形成由各种细胞器和细胞中其他物质组成的匀浆;将匀浆放入离心管,用高速离心机在不同的转速下进行离心,利用不同的离心速度所产生的不同离心力,就能将各种细胞器分离开。
ps：密度离心法应用于dna半保留复制验证实验中轻链带(离心管上部),杂合链带(位置居中)和重链带(最靠近离心管底部)在氯化铯溶液中的位置定位.
祝楼主新年快乐，新的一年，合家欢乐，幸福美满！！！

7. 研究细胞内各种细胞器的组成成分和功能需要将这些细胞器分离出来常用的方法是

答案是差速离心法
研究细胞内各种细胞器的组成成分和功能,需要将这些细胞器分离出来,常用的方法是差速离心法.差速离心法是将细胞膜破坏后,形成由各种细胞器和细胞中其他物质组成的匀浆;将匀浆放入离心管,用高速离心机在不同的转速下进行离心,利用不同的离心速度所产生的不同离心力,就能将各种细胞器分离开。

PS：密度离心法应用于DNA半保留复制验证实验中轻链带(离心管上部),杂合链带(位置居中)和重链带(最靠近离心管底部)在氯化铯溶液中的位置定位.

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8. 下列是从生物组织中分离得到的几种细胞器模式简图。请据图回答：

（1）研究细胞内各种细胞器的成分和功能，需要将它们分离出来，常用的方法是______。若图中几种细胞器取自同一生物器官，则该生物器官最可能是__________。 �0�2�0�2（2）图中能储存并表达遗传信息的细胞器是�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2 。（填字母）。 （3）A与C增大膜面积的方式依次是�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2�0�2 。（4）在分泌蛋白分泌过程中，图中D、B生物膜面积将会依次发生改变，由此可以说明生物膜的结构特点是_____________________________。答案 <初中Net化学czhx.cooco.net.cn@