有谁对ELISA试剂盒了解？？

1. 有谁对ELISA试剂盒了解？？

（一）ELISA测定技术的发展
  然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。   一、Elisa试剂盒测定技术的发展   临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。   1、基因工程试剂对免疫测定技术 发展的影响   免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各总化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。   HBsAg试剂特点（检测模式：临 床抗体夹心法）：   包被抗体为山羊多抗，多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。   酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位。   可测得HBsAg变异样品。   提高检测的特异性（99.98%）   提高检测的灵敏度，应用Parl Ehrich 学说（PEI）HBsAg标准品，对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml   elisa试剂盒的用途   测试剂盒检测原理   ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒 的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性
[编辑本段]（二） 操作步骤
  方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:   1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。   2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。   3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。   4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。   5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。   6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。   方法二 用于检测未知抗体的间接法：   用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，   每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。   ↓   加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔   中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）   ↓   于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，   37℃孵育30-60分钟，洗涤,最后一遍用DDW洗涤。   ↓   其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
[编辑本段]（三） 试剂器材
  1. 试剂   （1） 包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:   NaHCO3 1.59克   NaHCO3 2.93克   加蒸馏水至1000ml   （2） 洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15M   KH2PO4 0.2克   Na2HPO4·12H2O 2.9克   NaCl 8.0克   KCl 0.2克   Tween-20 0.05％ 0.5ml   加蒸馏水至1000ml   （3） 稀释液：   牛血清白蛋白（BSA） 0.1克   加洗涤缓冲液至100ml   或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用。   （4） 终止液（2M H2SO4）：   蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。   （5） 底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:   0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml   0.1M柠檬酸（19.2克／L） 24.3ml   加蒸馏水50ml。   （6） TMB（四甲基联苯胺）使用液:   TMB（10mg／5ml无水乙醇）0.5ml   底物缓冲液（PH5.5） 10ml   0.75％H2O2 32μl   （7） ABTS使用液:   ABTS 0.5mg   底物缓冲液（PH5.5） 1ml   3％H2O2 2μl   （8） 抗原、抗体和酶标记抗体。   （9） 正常人血清和阳性对照血清。   2. 器材:   （1） 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。   （2） 小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。   （3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

2. elisa试剂盒哪家质量好

选择elisa试剂盒的时候，需要考虑灵敏度是否高，数据是否准确，操作是否简单等方面的问题，此外，也要考虑你们实验的经费，合理选择试剂盒。在elisa试剂盒方面，武汉福来生物工程有限公司的还不错。

    温育方面，武汉福来生物提醒你：
    温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。

    最为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，这样造成一些不必要的麻烦。

    不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。

3. elisa试剂盒的优点

elisa试剂盒分为进口分装和原装两种。
elisa试剂盒的优点：
一、高效、灵敏、特异的抗体；
二、稳定的重复性和可靠性；
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；
五、最大限度的节省实验经费。
ELISA试剂盒的服务承诺：
一、产品质量保证，有问题免费包换
二、提供免费代测服务（为客户提供来样检测服务，最大限度实验结果的有效性）
三、提供全程技术指导。

4. elisa试剂盒和生物试剂的区别

ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗体ELISA检测。

生物试剂是指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物，以及临床诊断、医学研究用的试剂。

ELISA试剂盒就是把该实验需要的试剂按一定用量和比例组合起来的成品.一般都是按做多少次。生物试剂有很多，分别也是不一样的。就是elisa试剂盒基本是统一，而生物试剂按照商品不同的要求也是不一样的。

5. ELISA试剂盒有几种检测方法

双抗体夹心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜；
2.次日洗涤3次；
3.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤；
4.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤；
6.’最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

6. 常见的ELISA试剂盒都有哪些

　　常见的ELISA试剂盒都有:一、食品安全检验ELISA试剂盒
是指食品中的激素、药物、霉菌毒素、过敏原残留、转基因产品的检测试剂盒，以及微生物、维生素等的检测产品。
包括植物病毒、细菌、真菌、植物激素和转基因作物的农业诊断试剂盒，以及动植物疾病诊断类如猪、牛、羊、马等家畜和禽类以及宠物类检测试剂盒。
二、生物原装ELISA试剂盒以及各类国产ELISA试剂盒
1、细胞因子检测试剂盒：
如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等
2、心肌梗塞检测ELISA试剂盒
如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等
3、内分泌检测ELISA试剂盒
如甲状腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生长激素，生长抑素，内皮素，皮质醇，骨钙素，催乳素，促肾上腺皮质激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羟色胺，17-羟孕酮等等
4、肝纤维化检测ELISA试剂盒
如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶抑制因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等
5、自身免疫检测ELISA试剂盒
如甲状腺，盐水可提取核抗原抗体(ENA)，抗核抗体，DNA，抗心磷脂抗体，类风湿因子，循环免疫复合物，抗胰岛细胞抗体，胰蛋白酶原，Sm，大疱性类疱疮，蛋白酶，短膜虫法，肝-肾，肝-肾-胃，肌内膜抗体，角蛋白抗体，抗核抗体，抗核糖体蛋白抗体，抗聚角蛋白微丝蛋白抗体，抗链O，抗卵巢抗体，抗平滑肌抗体，抗线粒体抗体，等等
7、优生优育检测ELISA试剂盒
如早早孕，新生儿TSH，胎膜早破检测，抗子宫内膜抗体，抗心磷脂抗体，抗透明带抗体，抗卵细胞透明带抗体，抗卵巢抗体，抗精子抗体，巨细胞病毒，弓形体，风疹病毒，分娩预测，单核白细胞增多症，单纯疱疹病毒，促卵泡素，促黄体生成素，便隐血试纸，HCG等等
8、传染病检测ELISA试剂盒
如幽门螺杆菌，乙脑，乙肝，丙肝，丁肝，戊肝，庚肝，衣原体，性病，腺病毒，微小病毒B19，天疱疮，水痘-带状疱疹病毒，生殖支原体，伤寒，沙眼，腮腺炎，人型支原体，麻疹，轮状病毒，流行性出血热，淋球菌，莱姆病，柯萨奇，抗解尿支原体，军团菌，结核，胶原，尖锐湿疣，甲肝，脊髓灰质炎，急性胰腺炎尿胰蛋白酶，霍乱，呼吸道合胞病毒，肝吸虫，副流感，肺炎，带状疱疹，传染性单核细胞增多症，层粘蛋白，布鲁氏杆菌，百日咳，白喉，艾柯病毒，EB 病毒，A族链球菌等等
9、特种蛋白检测ELISA试剂盒
如免疫球蛋白，抗链O-aso，类风湿因子RF，C反应蛋白，微量白蛋白，β-2微球蛋白human，铁蛋白，转铁蛋白transferrin等等
10、肿瘤标志物检测ELISA试剂盒
如肿瘤标志物，组织多肽抗原，肿瘤相关因子，胰腺癌，直肠癌，细胞角蛋白片段，胃肠癌，铁蛋白，糖链抗原，神经特异性稀醇化酶，上皮膜抗原，乳腺癌，人抗小鼠抗体，前列腺，甲胎蛋白，肝癌，大肠癌，肺癌，大小便隐血检测，癌胚抗原，β-2微球蛋白等等

7. ELISA试剂盒可以应用在哪些领域

根据进口原装ELISA试剂盒和各类国产和进口分装的ELISA试剂盒可以分为下面几类1、细胞因子检测试剂盒：如白介素、选择素、集落刺激因子，肿瘤坏死因子，干扰素，转化生长因子，趋化因子，细胞因子受体，粘附分子，生长因子，凋亡因子等等2、心肌梗塞检测ELISA试剂盒如肌钙蛋白，肌红蛋白，C-反应蛋白等等3、内分泌检测ELISA试剂盒如甲状腺，胰腺，性激素，孕酮，睾酮，生长激素，生长抑素，内皮素，皮质醇，骨钙素，催乳素，促肾上腺皮质激素，促卵泡素，雌二醇，雌三醇，5-羟色胺，17-羟孕酮等等4、肝纤维化检测ELISA试剂盒如纤维连接蛋白，透明质酸，胶原，基质金属蛋白酶抑制因子，基质金属蛋白酶，层粘蛋白等等5、自身免疫检测ELISA试剂盒如甲状腺，盐水可提取核抗原抗体(ENA)，抗核抗体，DNA，抗心磷脂抗体，类风湿因子，循环免疫复合物，抗胰岛细胞抗体，胰蛋白酶原，Sm，大疱性类疱疮，ELISA试剂盒蛋白酶，短膜虫法，肝-肾，肝-肾-胃，肌内膜抗体，角蛋白抗体，抗核抗体，抗核糖体蛋白抗体，抗聚角蛋白微丝蛋白抗体，抗链O，抗卵巢抗体，抗平滑肌抗体，抗线粒体抗体，等等。

8. elisa试剂盒的主要设备

试剂（1）　包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:Na2CO3 1.59克NaHCO3　 2.93克加蒸馏水至1000ml（2）　洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15MKH2PO4 　0.2克Na2HPO4·12H2O　2.9克NaCl　8.0克KCl　0.2克Tween-20　0.05%　0.5ml加蒸馏水至1000ml（3）　稀释液：牛血清白蛋白（BSA） 0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。（4）　终止液（3M　H2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。（5）　底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M柠檬酸（19.2克/L）　 24.3ml加蒸馏水50ml。（6）　TMB（四甲基联苯胺）使用液:TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml底物缓冲液（PH5.5）　 10ml0.75%H2O2　 　32μl（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg底物缓冲液（PH5.5）　 1ml3%H2O2　 　2μl（8）　抗原、抗体和酶标记抗体。（9）　正常人血清和阳性对照血清。器材（1）　聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。（2）　小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。（3）　4℃冰箱，37℃孵育箱。试验原理试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。自备材料1． 蒸馏水。2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3． 振荡器及磁力搅拌器等。安全性1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。11． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。